全文：HPLC-DAD测定大茶树和小茶树的西湖龙井茶中EGCG的含量蒲首丞，潘立新，叶玲仙，陆方明 (浙江海洋学院萧山科技学院，浙江杭州311231)摘要 ［目的］采用HPLC-DAD对西湖龙井茶中的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的含量变化进行分析。［方法］采用Agilent C18色谱柱(4.6 mm ×150 mm，5 μm)，流动相:甲醇∶水(2%乙酸)15∶85;流速:1.0 ml/min;检测波长:276 nm;柱温:35 ℃。［结果］EGCG线性范围为0.152～3.040 μg，相关系数r为1，平均回收率97.61%，RSD为6.61%。［结论］该方法精密度、准确度良好，稳定性高，能简便、快速地测定大小茶树的西湖龙井茶中的EGCG含量。关键词 HPLC-DAD;西湖龙井茶;表没食子儿茶素没食子酸酯;含量龙井茶位列我国十大名茶之一，具有1 200多年历史。西湖龙井茶产于浙江杭州西湖区［1］。儿茶素作为西湖龙井主要的生物活性成分之一，主要化合物包括表儿茶素(EC)、表没食子儿茶素(EGC)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)等［2-3］。EGCG是西湖龙井中含量较高的儿茶素，现代研究表明，EGCG具有显著的抗氧化、抗肿瘤、抗突变和心血管疾病等作用，能够提高人体免疫功能，抑制肿瘤的生长，抑制肝脂和胆固醇的增长，对金黄色葡萄球菌等细菌有极强的抑制作用［4-5］。西湖龙井的明前开山茶一直都是研究人员和茶叶加工企业关注的焦点，而且明前开山茶价格也十分昂贵。该研究采摘的西湖龙井茶为杭州西湖龙井茶原产地龙坞保护区的明前开山茶。目前对EGCG的分离提取及功效研究的文献较多，但对明前西湖龙井茶青叶中EGCG含量的研究鲜有文献报道。笔者通过对龙坞同一保护区的大茶树和小茶树的西湖龙井茶EGCG含量测定，为人们的实际需要提供参考，为以茶叶加工企业提供试验依据。1 材料与方法1.1 材料 研究对象:西湖龙井茶青叶，杭州龙坞明前采集。主要试剂:表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)，上海源叶公司，含量98%;甲醇为色谱纯试剂;其他试剂均为分析纯;试验用水为艾柯超纯水。主要仪器:Agilent1260型高效液相色谱仪，Agilent公司，包括DAD检测器，Agilent chem工作站;电子分析天平，赛多利斯;恒温水浴锅，精宏公司;真空干燥箱，天呈;RA-25AA旋转蒸发仪，上海亚荣。1.2 方法1.2.1 色谱条件。色谱柱为Agilent C18色谱柱(4.6 mm ×150 mm，5 μm)，流动相:甲醇∶水(2% 乙酸)15∶85;流速:1.0 ml/min;检测波长:276 nm;柱温:35℃。1.2.2 对照品溶液的制备。精密称取经真空干燥24 h处理后的15.2 mg表没食子儿茶素没食子酸酯对照品，置于100 ml容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀，即得对照品溶液，于冰箱中低温保存备用。表没食子儿茶素没食子酸酯浓度为 152 μg/ml。1.2.3 供试品溶液的制备。分别准确称取样品约1.0 g，置于500 ml平底烧瓶中，加入100 ml 80℃水，置85℃的水浴中加热回流1 h，共水浴加热回流2次，经过滤收集滤液，最后减压浓缩滤液，定容至50 ml容量瓶中，摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液待测。2 结果与分析2.1 目标组分的确定 按照“1.2”项色谱条件下，对照品溶液和供试品溶液分别进样10 μl，DAD检测器检测分析，在波长为276 nm下是EGCG的最大吸收，DAD检测器检测记录储存200～400 nm的所有色谱，对照品与样品茶的EGCG的保留时间都在8.3 min(图1)。2.2 流动相的选择 测定EGCG含量，流动相为甲醇∶水系统和甲醇∶水(2%乙酸)系统，进行对比试验发现，2个系统都能使EGCG分离开来(分离度R＞1.5)，甲醇∶水系统中EGCG严重拖尾，而甲醇∶水(2%乙酸)系统中EGCG峰形比较好，故选择甲醇∶水(2%乙酸)15∶85为该测定方法的流动相系统。2.3 线性关系试验 精密吸取上述对照品溶液分析，进样量分别为 2、4、6、8、10、12、16、20 μl，测其峰面积，以标准溶液的进样量X为横坐标，以峰面积Y为纵坐标作图，得到线性回归方程为Y=774.33X-10.585，相关系数为r为1，表明EGCG在0.152～3.040 μg范围内与峰面积之间线性关系良好。2.4 精密度试验 精密吸取“1.2.2”项配制的对照品溶液10 μl进样，依上述色谱条件测定，重复进样5次，测定EGCG峰面积，RSD为0.38%，结果表明，仪器具有较好的精密度。2.5 稳定性试验 分别取“1.2.3”项制备的大茶树青叶、小茶树青叶2 种供试样品溶液 10 μl，于 0、2、4、6、8、10 h 进样测定，各重复进样6次，测定目标组分的含量，以考察供试品溶液的稳定性，10 h大茶树茶和小茶树样品EGCG组分RSD分别为2.8%、3.1%。结果表明，供试品溶液在10 h内基本稳定。图1 对照品与样品HPLC色谱注:A.对照品;B.大茶树;C.小茶树;1.EGCG。2.6 加样回收试验 精密称取已知含量的茶样品6份，分别精密加入一定量EGCG对照品，按供试品溶液制备方法制备样品溶液，依上述色谱条件测定含量。结果显示，该方法具有较高的准确度(表1)。表1 回收率试验结果2.7 样品中EGCG含量的测定 按照“1.2.3”项制备3个大茶树和3个小茶树西湖龙井茶叶供试品溶液，按“1.2.1”项色谱条件进样测定，每样重复进样3次，求峰面积均值，按外标法计算其含量。大茶树中EGCG的含量为:14.151 mg/g(RSD 0.56%)，15.534 mg/g(RSD 0.66%)，13.526 mg/g(RSD 0.75%)，平均含量14.404 mg/g;小茶树中EGCG的含量为:8.645 mg/g(RSD 0.56%)，9.326 mg/g(RSD 0.59%)，8.957 mg/g(RSD 0.63%)，平均含量 8.976 mg/g。3 结论采用HPLC-DAD法对大茶树和小茶树的西湖龙井茶中的EGCG进行了含量分析，试验结果表明，大茶树西湖龙井茶青叶中EGCG平均含量为14.404 mg/g，含量较高;小茶树西湖龙井茶青叶中EGCG平均含量为8.976 mg/g，比大茶树含量低。该试验为人们选择茶叶原料提供参考，为企业对原料等级划分提供了试验依据。该测定茶中EGCG含量的方法操作简单、重现性好、分析结果准确可靠，可用于原料茶的质量控制。参考文献［1］张龙，王飞娟，潘家荣，等.近红外光谱和模式识别技术在西湖龙井与浙江龙井茶叶鉴别中的应用［J］.红外，2012，33(3):44-48.［2］卢涛，兰先秋，朱斌，等.不同茶多酚中儿茶素的测定及柱层析法提取EGCG 的比较［J］.化工进展，2008，27(5):746-752.［3］王霞，高丽娟，林炳昌.表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的分离与制备［J］.食品科学，2005，26(9):242-245.［4］梁晓岚，陈春林.茶多酚的研究进展［J］.茶叶科学技术，1994(1):6-8.［5］张瑜，邹国林，彭少君.表没食子儿茶素没食子酸酯研究进展［J］.氨基酸和生物资源，1998，20(4):51-54.Quantitative Determination of EGCG of West Lake Longjing Tea from Big Tea Tree and Small Tea Tree by HPLC-DADPU Shou-cheng et al (Xiaoshan School of Science and Technology，Zhejiang Ocean University，Hangzhou，Zhejiang 311231)Abstract ［Objective］HPLC-DAD is used to analyze the content of EGCG from West Lake Longjing tea in different periods.［Method］Agilent C18(4.6 mm ×150 mm，5 μm)is taken as the column，methanol solution and 2%acetic acid water solution(15∶85，V/V)as the mobile phase，the velocity o f flow is 1.0 ml/min，the column temperature is 35 ℃，the inspect wave length is 276 nm.［Result］The linear range of EGCG is 0.152-3.040 μg，r=1，the average rate of recovery is 97.61%and the RSD is 6.61%.［Conclusion］The method was precise，accurate，highly stable，simple，convenient and rapid for the quantitative determination of EGCG.Key words HPLC-DAD;West Lake Longjing tea;EGCG;Content中图分类号 S571文献标识码 A文章编号 0517-6611(2014)12-03714-02基金项目 浙江省教育厅项目(Y200908478)。作者简介 蒲首丞(1978-)，男，浙江杭州人，讲师，博士，从事天然产物化学研究。收稿日期 2014-04-04